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H5N1亚型禽流感病毒NSl基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的初步建立
杨涛 1沈阳农业大学 2刘明 1张云 1刘春国 1杜绍范3
作者信息
- 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001
- 2. 沈阳,110161
- 3. 沈阳农业大学,沈阳,110161
- 折叠
摘要
采用RT-PCR技术扩增禽流感病毒A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NS1基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上.转化DH5a感受态大肠杆菌扩增后提质粒,经BamHI和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析表明筛选到重组质粒pc2X-NS1.SDS-PAGE电泳显示重组质粒转化TB1大肠杆菌后,经0.3mmol/L的IPTG诱导,融合蛋白MBP-NS1得到大量表达,融合蛋白以可溶形式存在,分子量约为67ku.Western-blot结果表明融合蛋白MBP-NS1蛋白能够与H5N1亚型活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应,而不能够与H5N1灭活苗免疫鸭血清发生反应.初步建立了以经过纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的ELISA的检测方法.NS1蛋白在大肠杆菌的成功表达及ELISA检测方法的初步建立为禽流感灭活苗免疫家禽与禽流感病毒感染家禽的鉴别诊断奠定了基础.
关键词
禽流感病毒/NS1基因/原核表达/ELISA检测/禽流感灭活苗/鉴别诊断引用本文复制引用
主办单位
中国畜牧兽医学会会议名称
中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会会议时间
2005-09-01会议地点
四川雅安会议母体文献
第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集(下卷)页码
609-612出版时间
2005