利用PCR技术克隆了来源于Saccharomyces cerevisiae ALJ036的γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸合成酶(γ-glutamyl-cysteine synths)编码基因gsh 1,连接多拷贝表达载体pGAPZA,转化Pichia pastoris x-33,构建了重组菌Pichia pastoris x-33(pGAPZA-gsh 1);在高浓度Zeocin平板上筛选多拷贝阳性转化子,并采用PCR的方法进行验证.对阳性转化子的γ-glutamyl-cysteine synthas酶活力进行了测定,结果显示,重组酵母的γ-glutamyl-cysteine synthas的酶活力是宿主菌的2.99倍,在液体YEPD中重组菌GSH的产量为42.2 mg/L,是宿主菌的1.6倍.
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