检测和鉴别猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立

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中文摘要：根据GenBank上登录的所有猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)基因组全序列,选择高度保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗特异性引物P2及猪瘟强毒特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法.应用该方法从猪瘟兔化弱毒株和猪瘟强毒石门株基因组中扩增出了大小分别为447bp和343bp的一条特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447bp和343bp的两条特异性片段,但对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)、乙型脑炎病毒(JEV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的细胞培养物以及正常细胞基因组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性.该方法可以检测出0.04pg的病毒RNA.对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测,结果表明,有14份类似猪瘟强毒,1份类似猪瘟弱毒.用限制性片段长度多态性(RFLP)对15份病料、猪瘟兔化弱毒株和石门株的RT-nPCR产物进行分析,发现石门株和14份黑龙江省强毒样品的扩增产物中均能被ApaⅠ切开,而猪瘟兔化弱毒株和1份黑龙江省弱毒样品无此识别位点,但有1个BanⅡ识别位点.从14份样品中抽检7份,对NS5B基因进行种系发生分析表明,它们均接近于石门株.本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测猪瘟病毒感染并把强毒和弱毒区分开,有助于减少未感染的免疫猪被误杀的可能,降低经济损失.

作者：

李艳、延边大学农学院、仇华吉、王秀荣、张守发、朱庆虎、李娜、东北农业大学动物医学院、李国新、童光志

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作者单位：

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001

吉林,龙井,133400

延边大学农学院,吉林,龙井,133400

黑龙江,哈尔滨,150030

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关键词：

猪瘟病毒聚合酶链式反应限制性片段长度多态性基因组序列鉴别诊断

主办单位：

中国畜牧兽医学会

中国免疫学会

会议名称：

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

会议时间：

2005-05-01

会议地点：

济南

会议母体文献：

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集

页码：

221-226

出版时间：

2005