猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白重组腺病毒的构建、鉴定与免疫原性的研究

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中文摘要：猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)的必需病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep蛋白)和核衣壳蛋白(Cap蛋白),其中Cap蛋白含有病毒主要抗原表位,是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因.本研究利用PCR技术将Cap蛋白基因克隆入人5型腺病毒穿梭载体(pShuttle-CMV),并与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM)共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞,经三次空斑试验纯化获得了重组腺病毒rAd-Cap,测定其TCID60为1013.7/ml.用RT-PCR、间接ELISA、Westernblot和IPMA等试验证明了Cap蛋白在腺病毒中获得稳定表达.将该重组病毒免疫普通小白鼠,用间接ELISA和Western-blot测定其抗体,抗体滴度最高可达1:12800;用MTT法测定其淋巴细胞增殖,证明该病毒在二免后20d左右能刺激鼠的淋巴细胞增殖.从而为发展PCV2的重组腺病毒基因工程疫苗奠定了基础.

作者：

王先炜、姜平、李玉峰、蒋文明

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作者单位：

南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏,南京,210095

关键词：

猪圆环病毒 Cap蛋白重组腺病毒构建鉴定免疫原性

主办单位：

中国畜牧兽医学会

会议名称：

中国畜牧兽医学会第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会

会议时间：

2005-05-21

会议地点：

济南

会议母体文献：

2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集

页码：

7-10

出版时间：

2005