摘要
根据测得的鹅副粘病毒(GPMV)NA-1株F基因序列,设计一对特异性引物,用作者构建含F基因的质粒pGF为模板,PCR扩增F基因片断(去除终止密码子),与转座载体pFastBac Ⅰ连接,构建重组质粒pFastBac-F,并进行测序鉴定；根据测得的鹅细小病毒(GPV)GD-01株VP3基因序列,设计一对特异性引物,用作者构建的重组质粒pGVP3为模板,PCR扩增带有Linker的VP3基因,命名为LVP3.再将重组质粒pFastBac-F与LVP3片段连接,构建重组转座载体pFF-LVP3,转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得的重组Bacmid F-L-VP3转染Sf9昆虫细胞,并进行检测。结果,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测获得蛋白特异条带,相当分子量约12 3kDa.将表达蛋白免疫雏鹅,经抗体测定,证明表达的F-VP3重组蛋白能诱导机体产生特异性免疫应答。
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