摘要
根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD 01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM(R)-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达。 结果表明,GPV GD-01株VP3基因全长1 605 bp,编码534个氨基酸(DQ665790),与已发表的GPV、番鸭细小病毒(MDPV)毒株进行比较分析,结果显示GPV GD-01株与其他GPV、MDPV核苷酸、氨基酸同源性分别平均为96.15％、80.1％,97.78％、89.13％,说明GPVVP3基因具有较高的遗传稳定性。结合素水性、表面极性、抗原位点分析比较GPV、MDPV VP3基因,为研究GPV和MDPV感染谱差异的分子机制提供了一定的理论基础。原核表达研究显示,VP3蛋白的最高表达量占整个菌体蛋白含量的29.9％,经表达条件优化可产生大量可溶性VP3表达蛋白。SDS-PAGE与Western-blot分析,显示表达的VP3蛋白分子质量在60 000左右,并能与鼠抗GPV阳性血清反应,证明具有一定的反应原性,为进一步研制基因工程疫苗及诊断制品奠定了基础。
NETL