摘要
目的:构建稳定、高效表达重组人心肌肌红蛋白(rhMb)的基因工程菌株,为临床检测早期心肌损伤及预后提供诊断试剂,促进肌红蛋白诊断标准化的研究。 方法:采用RT-PCR技术从人心肌组织总RNA中克隆出全长的人心肌肌红蛋白基因,将其插入到PMD18-T simple克隆载体中,转化DH5α克隆菌株。经酶切和测序对目的基因分析,再插入到pET-21a(+)表达载体中,转化BL21(DE3)。对诱导表达的目的蛋白行SDS-PAGE和运用锐普心梗仪检测重组蛋白的抗原性并准确定量。 结果:测序表明RT CR所得的肌红蛋白基因hMb序列与GenBank(NM 005368.2)中报道的序列一致,目的蛋白表达量达菌体总蛋白的15％,重组蛋白抗原性良好。 结论:成功构建了稳定、高效表达重组人心肌肌红蛋白基因工程菌株。
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