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载体表达的siRNA分子对猪圆环病毒2型复制的抑制作用

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[目的]寻找一种基于RNA干扰技术的猪圆环病毒2型感染的防控方法. [方法]根据猪圆环病毒2型毒株基因组核苷酸序列,设计了3条特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,其中2条针对猪圆环病毒1型和2型复制酶基因(rep),1条针对猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因(cap),将合成的DNA片段退火形成双链,分别连接到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ ZsGreen载体鼠源U6启动子下游,连接转化大肠杆菌得到阳性克隆,测序鉴定后分别命名为Retro-SH1,Retro-SH4,Retro-SH6.用上述质粒转染PCV2感染前、后的Dulac细胞及肌肉注射PCV2感染前、后的BALB/c小鼠,应用实时定量PCR试验评价其对病毒在细胞及小鼠体内复制的抑制作用,免疫组化法检测脾脏中病毒的存在. [结果]感染PCV2前或后转染500 ng Retro-SH1,Retro-SH4,Retro-SH6质粒能有效抑制PCV2在Dulac细胞上的复制,抑制率最高可达99%以上,对10株不同来源的临床分离株在细胞中复制的抑制作用同样明显,且不同毒株间差异不大.动物试验中,肌肉注射10 μg上述不同siRNA分子对小鼠体内PCV2的复制有一定的抑制作用,其抑制率在26至99%之间. [结论]载体表达的siRNA分子可能成为防控猪圆环病毒2型感染的一种新工具.

RNA干扰 猪圆环病毒 抑制作用

中国畜牧兽医学会

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

2008-09-01

大连

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集

435-440

2008