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鹅细小病毒vp3基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达
胡桂学 1张鑫 1徐佳 1王淳玉 1许洪洁1
作者信息
- 1. 吉林农业大学 动物科学技术学院，吉林 长春 130118
- 折叠
摘要
根据已发表的鹅细小病毒(GPV)B株核苷酸序列，设计并合成了一对引物，PCR扩增GPV吉林分离株主要结构蛋白vp3基因，获得与预期大小相符约1.6ku核苷酸片段。将该片段纯化后克隆入pMD18-T载体，转化感受态大肠杆菌JM109，双酶切鉴定，筛选阳性重组质粒并测序。经过酶切和连接反应，将vp3基因克隆入真核表达载体pVAXI，转化感受态大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆，提取质粒，进行了PCR和酶切鉴定。通过脂质体法将pVAXI-VP3转染Vero细胞，RT-PCR和间接免疫荧光法检测。结果显示，vp3基因克隆成功，与GPV B株核苷酸序列同源性为96.2%；PCR和酶切鉴定结果证实，成功构建了含GPV vp3基因的真核表达载体pVAXI-VP3。提取转染该质粒的Vero细胞RNA，RT-PCR扩增，在1000bp～2000bp之间可见一明显DNA条带；间接荧光抗体染色转染细胞，在细胞表面可见特异荧光。
关键词
鹅细小病毒/VP3基因/真核表达载体/Vero细胞引用本文复制引用
主办单位
中国畜牧兽医学会/中国免疫学会会议名称
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会会议时间
2008-07-01会议地点
北京会议母体文献
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集页码
75-77出版时间
2008