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猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达
陈建飞 1冯力 1时洪艳 1孙东波 1白兴华 1佟有恩2
作者信息
- 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001
- 2. 哈尔滨维科生物技术开发公司，黑龙江 哈尔滨 150001
- 折叠
摘要
应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段，并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF，编码由441个氨基酸残基组成的多肽，未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%；推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板，用分别含有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF，其PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体，构建的重组质粒命名为pET-30a-PN；将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，在IPTG诱导下进行表达；SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4ku的重组蛋白，重组蛋白以包涵体形式存在；薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%；Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应，说明该重组蛋白具有免疫学活性。
关键词
猪流行性腹泻病毒/N蛋白基因/序列同源性/重组蛋白/免疫学活性/遗传变异引用本文复制引用
主办单位
中国畜牧兽医学会/中国免疫学会会议名称
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会会议时间
2008-07-01会议地点
北京会议母体文献
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集页码
177-181出版时间
2008