猪、牛体细胞α-1,3-半乳糖基转移酶基因的敲除以及人白细胞抗原HLA-G1基因的敲入

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中文摘要：本实验中利用已克隆到pMD-3arm载体上4.5kb的猪α-1,3-半乳糖基转移酶基因片段，该片段包括了大部分第8内含子和一部分第9外显子。运用PCR的方法，从猪的基因组中获得约1.9kb的猪α-1,3-GT的第9外显子序列的扩增产物，将片段克隆于pGEM-Teasy载体。将4.5kb和1.9kb片段分别作为打靶载体的5’、3’同源臂，以Neor为正选择标记基因，以GFP为负选择标记基因，构建敲除猪α-1,3-半乳糖基转移酶基因并同时能表达人白细胞抗原HLA-Gl基因的的打靶载体pZJ。以线性化打靶载体DNA pZJ(带有报告基因GFP和Neor)为打靶的外源基因，通过脂质体介导的方法将线性化载体pZJ分别转染牛、猪的成纤维细胞，经G418筛选出阳性细胞克隆，并进行扩大培养，提取阳性克隆的基因组DNA进行PCR检测。

作者：

周健、林爱星、陈永福、康熙雄

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作者单位：

首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心 100050

关键词：

牛体细胞猪体细胞人白细胞抗原选择标记基因半乳糖基转移酶

主办单位：

中国生物化学与分子生物学会

中国人民解放军总医院

会议名称：

中国生物化学与分子生物学会临床应用生物化学与分子生物学分会成立大会暨第一届临床应用生物化学与分子生物学学术大会

会议时间：

2005-09-01

会议地点：

北京

会议母体文献：

中国生物化学与分子生物学会临床应用生物化学与分子生物学分会成立大会暨第一届临床应用生物化学与分子生物学学术大会论文集

页码：

61-62

出版时间：

2005