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九节茶ISSR反应体系的研究

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以九节茶叶片提取的基因组DNA为材料,对影响ISSR-PCR扩增效果的一些因素,诸如dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量、退火温度以及循环次数等指标进行筛选和优化。结果表明,20 μL ISSR反应体系含:10×PCR Buffer、0.4mmol·L-1dNTPs、2U Taq DNA聚合酶、0.6μmol·μL-1引物、5 ng模板DNA。PCR扩增程序为:94℃预变性2 min,94℃变性30s,44.8℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环,最后72℃延伸7min,置4℃保存。应用该ISSR体系对10份九节茶种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。

郑郁善、黄宇、荣俊冬、陈礼光

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福建农林大学 福建省中药材GAP工程技术研究中心,福建 福州 350002

九节茶 种质资源 PCR扩增 基因组 聚合酶

中华中医药学会

青海省中医学会

中华中医药学会2009年药用植物化学与中药资源可持续发展学术研讨会

2009-07-01

青海

中华中医药学会2009年药用植物化学与中药资源可持续发展学术研讨会论文集

111-116

2009