青天葵总DNA的提取与随机扩增多态性DNA反应条件的建立

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中文摘要：目的：建立并优化青天葵样品总DNA提取方法及随机扩增多态性DNA(RAPD)反应。方法：采用改进的高盐低pH法提取青天葵鲜叶和药材样品，通过正交设计和均匀设计，改变反应体系和扩增程序优化随机扩增多态性DNA。结果：使用高盐低pH值法可较好地提取新鲜叶片的DNA，药材叶片含杂质较多，但都能用于RAPD。反应体系为：缓冲液2.0μl，0.5μl dNTP(各2.5mmol·L-1)，0.8 μl Mg2+(25 mmol·L-1)，0.5 μl引物(20pmol·μl-1)，0.2 μl Taq酶(5U·μ1-1)，1 μl DNA(50 ng)，1 μl BSA(20 mg·ml-1)，加双倍蒸馏水至20 μl。扩增程序为：94℃预变性3 min；94℃变性30 s，40℃退火30 s，72℃延伸60 s，40个循环；72℃延伸5 min。结论：建立并优化了的青天葵样品总DNA提取方法及RAPD反应体系。

作者：

杜勤、魏智强、田军

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作者单位：

广州中医药大学中药学院，广东广州 510405

关键词：

青天葵 DNA提取 RAPD反应体系随机扩增多态性DNA 正交设计均匀设计

主办单位：

全国医药技术市场协会

会议名称：

生物技术药物创新研究与前沿技术研讨会

会议时间：

2009-08-24

会议地点：

成都

会议母体文献：

生物技术药物创新研究与前沿技术研讨会论文集

页码：

194-196

出版时间：

2009