人内皮抑素和人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达

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中文摘要：目的：为了构建编码人内皮抑素/人血清白蛋白的重组表达质粒，并在毕赤酵母(Pichia pastoris)中获得高效表达。方法：通过重叠延伸PCR的方法，将ES和HSA两片断连接，并将其克隆入pGEM-T载体中，测序正确后，将其克隆至酵母表达载体pPIC9中，然后将鉴定正确的重组表达载体pPIC9-ES/HSA线性化后转化入GS115宿主菌。采用原位双膜法筛选表达株，并将其进行PCR鉴定后扩大培养，获得的含融合蛋白的培养液盐析后经阳离子交换层析、阴离子交换层析和亲和层析纯化，采用MTT法测定融合蛋白中内皮抑素的活性。结果：成功构建了人内皮抑素/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIC9-ES/HSA，并筛选到表达较为理想的重组菌株pPIC9-ES/HSA-GS115，经甲醇诱导表达后纯化，融合蛋白的纯度达到92％以上，并具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞的增殖活性。结论：成功获得了具有人内皮抑素生物活性的重组人内皮抑素/人血清白蛋白融合蛋白，该研究结果未见文献报道。

作者：

赵媛媛、吕茂民、杨梅、玛晶晶、章金刚

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作者单位：

军事医学科学院野战输血研究所，北京 100850 解放军后勤指挥学院

军事医学科学院野战输血研究所，北京 100850

关键词：

人内皮抑素人血清白蛋白融合蛋白毕赤酵母重组表达质粒增殖活性

主办单位：

中国输血协会

会议名称：

全国血液制品学术交流会

会议时间：

2009-04-19

会议地点：

成都

会议母体文献：

全国血液制品学术交流会论文集

页码：

93-97

出版时间：

2009