产碱杆菌DN25氰降解酶法机理研究

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中文摘要：本文利用实验室分离保藏的一株具有高效降氰活性的产碱杆菌Alcaligenes sp.DN25,通过分析分别以氰化钾、甲酰胺为底物的降解产物和文献报道[1]的F-、Pb2+、Hg2+、N3-对其降氰活力的影响来确定其降解途径,并根据目的酶的催化机理对产酶条件进行了优化.结果表明,氰的降解途径可推断为氰水解酶、氰水合酶和酰胺水解酶共同作用的水解途径,而其中氰水解酶的活性起主要作用,并且终产物为甲酸和氨,甲酰胺为中间产物;0.2 mM的F-、Pb2+、Hg2+对降氰酶有一定的抑制作用,0.2 mM Fe3+对氰降解酶活性有一定的促进作用，尤其10 mM N3-对氰降解酶的促进作用最强，符合文献报道[1]的其他降氰菌株的特性，再次确定了产碱杆菌DN25的代谢机理；在培养基中分别添加四种含硫物质，发现DL-半胱氨酸对菌体产酶有明显促进作用，DL-甲硫氨酸可同时提高菌株的产酶水平和细胞生长量，从而使得培养物比活分别达到1.26 U/mL和2.10U/mL.在1L三角瓶中进行扩大培养优化，得到最佳培养条件：装液量100 mL，pH 9.0，接种量8%，在基本培养基中添加0.8%的DL-甲硫氨酸.菌株的生长曲线和产酶曲线趋势基本一致，培养40 h后进入稳定期，培养物比活力平均值为2.18 U/mL，是优化前的3.46倍.研究结果为将来利用酶制剂进行降解和酶纯化分离工作奠定了基础.

作者：

汪艳华、刘幽燕、王顺成、董园、李青云、童张法、覃益民、许建和

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作者单位：

广西大学化学化工学院,广西南宁,530004

华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237

关键词：

产碱杆菌氰水解酶氰水合酶代谢机理产酶条件优化酶纯化分离

主办单位：

中国化工学会

会议名称：

第六届全国化学工程与生物化工年会

会议时间：

2010-10-29

会议地点：

长沙

会议母体文献：

第六届全国化学工程与生物化工年会论文集

页码：

1-8

出版时间：

2010