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猪骨骼肌肌酸转运载体克隆及其mRNA表达组织特异性

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以5月龄长白猪为试验动物,利用RT_PCR和RACE法相结合克隆猪骨骼肌肌酸转运载体(Creatine transporter,CrT)基因,采用原位RT-PCR法和酶组织化学法相结合测定猪腰大肌中CrTmRNA表达分布情况。结果发现:①猪骨骼肌CrTcDNA全长2734bp,其中5’UTR.长233bp,3’UTR长233bp,开放性阅读框(ORF)长1908bp,编码635个氨基酸。基因序列分析显示猪骨骼肌CrT预测氨基酸序列与人(L31409)、牛(AF027197)和鼠CrT(AB077327)的同源性均在90%以上。 基因预测分析发现猪骨骼肌CrT蛋白分子量为70440.87 Da,等电点为6.044,是一种具有12个跨膜区域结构的疏水性蛋白质。②原位RT-PCR检测显示猪腰大肌中CrTmRNA主要在肌纤维细胞内表达,其中肌纤维面积较大细胞中的信号越强,染色斑点面积与肌纤维面积呈显著正相关,而酶组织化学测定发现猪腰大肌βR型肌纤维显著小于αR肌纤维,而aR型肌纤维又显著小于αW型肌纤维(P<0.05)。这表明猪骨骼肌CrT mRNA分布可能与肌纤维特性有关,并可能主要分布在快速型肌纤维中。

代发文、冯定远

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华南农业大学动物科学学院,广州 510642

动物模型 骨骼肌 肌酸转运载体 肌纤维

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