以‘软条白沙’枇杷三倍体株系为试材,采用L25(56)正交设计方法,对影响枇杷SCoT-PCR反应的Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶及模板DNA用量等因素进行优化筛选,并对最适退火温度进行了探讨。建立了适于不同倍性枇杷分析的SCoT-PCR扩增体系,即20μL的优化体系中含有:Mg2+1.5 mmol·L-1,dNTPs0.35mmol·L-1,引物0.5μmol·L-1,Taq酶0.5U,模板DNA50ng。引物最适退火温度为51.8℃。应用优化的反应体系,对三个枇杷品种(‘泸州六号’:2x,3x,4x,5x;‘龙泉1号’:2x,3x,4x;‘早红3号’:2x,3x,4x)的10个不同倍性株系进行扩增,结果表明:9个引物共扩增出128条带,片段大小为100-2000bp,其中多态性条带84条,多态率为65.6％,与相应的二倍体比较,多倍材料均发生了不同程度的遗传变异。
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