乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究

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中文摘要：本试验通过收集某猪场一例发病种公猪的睾丸病料，处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合RT—PCR方法分离鉴定JEV贵州分离株(GZ株)，然后根据GenBank登录的日本乙型脑炎病毒SA14和SA14—14—2株全基因序列设计并合成一对扩增E基因的特异性引物，用RT—PCR方法扩增出JEV贵州分离株E基因，并将E基因克隆到pMD19-T载体上，构建重组质粒pMD19-T-E，经双酶切鉴定、测序及序列分析正确后，再将E基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上，成功构建乙脑病毒E基因原核表达质粒pET-32a-E，将构建好的原核表达质粒pET-32a-E，转化至宿主菌BL21(DH3)中，诱导表达目的蛋白，表达产物经SDS—pAGE电泳和western blot分析，得到了约59kDa左右条带，与预期大小相符，进一步提取、纯化和浓缩目的蛋白，并将其加入弗氏佐剂后免疫小鼠，免疫后采血检测抗体。结果显示：乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达目的蛋白能诱导小鼠产生了一定抗体水平，该研究为乙型脑炎驻单位疫苗的研究奠定了基础。

作者：

汤德元、王凤、马萍、罗险峰、李春燕、曾智勇、徐健、刘建

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作者单位：

贵州大学动物科学学院，贵州贵阳 550025

贵州省动物疫病预防控制中心，贵州贵阳 550008

关键词：

猪乙型脑炎病毒 E基因原核表达免疫原性

主办单位：

中国畜牧兽医学会

会议名称：

中国畜牧兽医学会养猪学分会五届三次理事会暨生猪产业科技创新发展论坛

会议时间：

2012-08-01

会议地点：

长春

会议母体文献：

中国畜牧兽医学会养猪学分会五届三次理事会暨生猪产业科技创新发展论坛论文集

页码：

385-390

出版时间：

2012