摘要
本文以一株携带适合真菌转化的双元载体pBIG2RHPH2(携带潮霉素B磷酸转移酶HPH基因和新植霉素磷酸转移酶NP7Ⅲ基因)的根癌农杆菌C58C1为介导，成功转化一株广泛无致病力、产孢正常且具有异宗交配能力的野生型稻瘟病菌CY2，构建出2000个潮霉素B抗性稳定遗传的转化子库。结果表明，根癌农杆菌介导稻瘟病菌转化体系中，以OD600值为0.2，200μmol/L乙酞丁香酮(AS)诱导，IM培养基(pH5.2)为共培养4d，含有200μg/ml潮霉素B、200μg/ml头孢噻肟钠和200μg/ml壮观霉素的CM培养基为选择培养基的条件，最适宜稻瘟病菌的转化;同时，对传统的共培养载体进行优化，将用于共培养的滤纸剪成5mm左右的滤纸条，倒铺于选择培养基上，滤纸条边沿长出的放射状菌落更利于挑取，并减少了假阳性的可能性，减少了传统反复抗生素抗性筛选的复杂工序，提高了转化子的获取效率，平均转化效率可达350～500个转化子/105个分生孢子。
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