定向进化提高细胞色素P450sca-2在大肠杆菌中的可溶表达

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中文摘要：本课题利用基因工程菌E. coli作为宿主菌表达该P450酶，以期解决链霉菌发酵过程中转化效率低且成本较高的问题。具体研究中首先利用DNAWorks设计并人工合成具有大肠杆菌密码子偏爱性的P450sca-2基因。重组蛋白在大肠杆菌中能够大量表达，但大多以包涵体的形式存在，少部分可溶表达的蛋白经纯化具有CO差谱和催化美伐他汀的活性。为了进一步提高其可溶性，引入绿色荧光蛋白(GFP)作为报导蛋白，分别以易错PCR和DNA shuffling的方法引入随机突变，经过三轮定向进化，得到了22个可溶性有明显提高的突变株，其中有些突变株几乎完全可溶，其可溶表达量提高了近30倍。本研究为在大肠杆菌中进一步研究细胞色素P450sca-2提供了依据，对该酶的工业应用有很大的指导意义。

作者：

李盼、关宏、李近、林章凛

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作者单位：

清华大学化学工程系,北京100084

齐齐哈尔药学院微生态工程技术中心,黑龙江齐齐哈尔161042

关键词：

大肠杆菌细胞色素绿色荧光蛋白定向进化可溶表达

主办单位：

中国化工学会

陕西省化工学会

会议名称：

第五届全国化学工程与生物化工年会

会议时间：

2008-10-01

会议地点：

西安

会议母体文献：

第五届全国化学工程与生物化工年会论文集

页码：

1028

出版时间：

2008