摘要
目的：探讨Rab7b在HHT诱导K562细胞凋亡中的作用及细胞自噬与凋亡的关系.方法：用MTF法检测HHT对K562细胞增殖抑制作用,用Annexin V/PI双染法检测K562细胞凋亡,并用Western blot检测自噬体的标志物LC3的表达,用自噬抑制剂3-Methyladenine(3-MA)抑制K562细胞自噬后检测HHT诱导的K562细胞凋亡变化,并用West-ena blot检测caspase3、9的蛋白表达及ERK1/2、Akt、Beclin 1的变化,同时,我们构建了Rab7b、Rab7b的持续活化型突变(Rab7b-Q67L)、Rab7b的失活型突变(Rab7b-ACC)和Rab7b干扰(Rab7b-RNAi)质粒,转染到K562细胞,用Annexin V/PI双染法检测表达不同突变型的Rab7b对K562细胞凋亡的影响,并用Western blot检测caspase3、9及ERK1/2、Akt通路蛋白的表达.
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