牛乳腺炎无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码抗原表位截短序列表达产物抗原性鉴定

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中文摘要：目的：本实验通过克隆与高效表达无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码蛋白抗原优势区,并进行抗原性分析及鉴定。方法：根据Genbank上公布的牛乳腺炎无乳链球菌辅助蛋白AP1(EU929387.1)基因序列,利用生物信息学学软件Primer5.0和DNAMAN,根据其骨架蛋白保守序列设计、合成了1对克隆引物,以分离于内蒙古东部地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模版,扩增辅助蛋白AP1基因序列,经克隆与测序后构建重组表达载体AP1-pET30转化大肠杆菌工程菌BL21,并进行高效表达,经亲和层析纯化后进行western blot鉴定.结果：结果表明克隆的抗原表位序列片段大小为714bp,编码238氨基酸残基,与GenBank上公布的AP1 (EU929387.1)基因序列相似性达到99.72％,氨基酸残基相似性达到99.58％.经诱导获得可溶性高效表达,纯化后重组蛋白的纯度达到95％以上.Western blot分析结果表明重组蛋白能够被牛源无乳链球菌阳性血清识别,具有良好的反应性.结论：该实验为进一步研究辅助蛋白AP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了实验基础.

作者：

LIU Yang、刘洋、WU Jin-hua、吴金花、BU Ri-e、布日额、LIU Yan、刘燕、XILIN Gao-wa、锡林高娃、WANG Xue-li、王学理、XUE Xiao-yang、薛晓阳

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作者单位：

College of Life Science,Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao 028043,Inner Mongolia,China

Research Institute of Pathogenic in Milk,Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao,Inner Mongolia 028043,China

College of Animal Science and Technology,Inner Mongolia University for Nationalities

内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028043

内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所,内蒙古通辽028043

内蒙古民族大学动物科技学院,内蒙古通辽028043

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关键词：

牛乳腺炎无乳链球菌抗原性分析基因表达免疫机制

主办单位：

中国畜牧兽医学会

会议名称：

中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十二届学术研讨会

会议时间：

2012-12-01

会议地点：

长春

会议母体文献：

中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十二届学术研讨会论文集

页码：

11-18

出版时间：

2012