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鸭源大肠杆菌ZYD2与多杀性巴氏杆菌YB2原生质体融合及融合菌株的鉴定分析
李木子 1蒋文灿 1刘雪梅 2曾静静 1罗念 1程平1
作者信息
- 1. 四川农业大学动物医学院 四川,雅安625014
- 2. 动物疫病与人类健康四川省重点实验室 四川,雅安625014
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摘要
目的：以新霉素(Neomycin)标记的ZYD2(NEOs)和YB2(NEOr)作为亲本菌株,培育具有双亲本菌株免疫原性的融合菌株。方法：在溶菌酶作用下,制备两亲本菌株原生质体，聚乙二醇4000诱导原生质体发生融合，利用NEO标记及亲本菌株培养条件不同筛选阳性融合子。结果：ZYD2和YB2可分别得到95.32％和95.25％的原生质体制备率以及32.19％和33.52％的再生率。在含NEO的麦康凯平板上传代培养获得5株稳定遗传的融合菌株。5株融合菌株可同时凝集双亲菌株鸭抗阳性血清。染色镜检观察融合菌株为革兰氏阴性中等大小杆菌。利用双重PCR检测，2株检测到到双亲本菌株部分外膜蛋白A(OmpA)基因和部分外膜蛋白H(OmpH)基因，2株只检测到部分OmpA基因，另1株检测不到任何条带。测序结果表明检测到的部分基因片段与亲本菌株的相关基因片段同源性为100％。微量凝集反应显示，外周血可以检测到双亲本菌株抗体，抗体效价在二次免疫后可以维持较稳定水平。结论：获得5株融合菌株具有双亲本菌株免疫原性且可稳定遗传。
关键词
鸭源大肠杆菌/多杀性巴氏杆菌/原生质体融合/菌株鉴定引用本文复制引用
主办单位
四川省畜牧兽医学会会议名称
四川省畜牧兽医学会2012年学术年会会议时间
2012-11-01会议地点
成都会议母体文献
四川省畜牧兽医学会2012年学术年会论文集页码
395-401出版时间
2012