摘要
CYP2E1是代谢药物及环境中毒物的关键酶.以草鱼肝细胞为反应体系,选取氯唑沙宗为底物,采用反相高效液相色谱法测定其产物6-OH-氯唑沙宗的量从而反映CYP2E1活性,并采用该酶特异性诱导剂乙醇对其进行诱导,观察其酶活变化及氯唑沙宗在细胞中代谢情况.结果表明,该测定方法简便、准确,能够很好的反映CYP2E1的酶活.氯唑沙宗在草鱼肝细胞中的基础代谢较低,经过对CYP2E1的诱导条件的优化及筛选,得到最佳诱导剂剂量为4μg/mL、诱导时间为24h、底物浓度为50μg/mL并且孵育时间为1h时,其酶活达到最高,约为0.47μg/min/mg.对照组和诱导组的草鱼肝细胞中氯唑沙宗的消除方程分别为Ct=46.56e-0.038t和Ct=44.54e-0.052t,消除半衰期(tt/2)分别为202.0945h和28.7496h,差异极显著,表明乙醇诱导的CYP2E1能够加快底物的代谢.酶促反应动力学方程分别为1/V--192.76×1/[S]+1.7056和1/V=52.439×1/[S]+0.8963,其酶促反应动力学参数表明乙醇诱导的CYP2E1与底物的亲和力较高,酶促反应强度较大.该结果能够为CYP2E1代谢的药物及环境毒物的研究提供理论依据.
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