摘要
本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的B、C抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。根据S基因的B、C抗原位点区序列设计一对引物,从S基因克隆质粒19T-S1扩增了含B、C抗原位点的基因片段(以SBC表示).将SBC插入pMD19-T载体构建了19T-SBC,再用EcoRⅠ/HindⅢ酶切SBC亚克隆至pET-32a(+)构建了重组质粒pET-32a-SBC.将pET-32a-SBC转入BL21进行诱导表达,并确定其最佳表达条件。亲和层析纯化重组SBC蛋白,分别免疫兔和猪制备阳性血清,并测定了抗体效价和抗体活性。结果表明的SBC基因片段大小为549bp,pET-32a-SBC在大肠杆菌中的最佳表达条件为IPTG诱导浓度为0.6mmol/L、最佳诱导时间为4h,最佳诱导温度为32℃,重组SBC蛋白约为20.1KDa,主要以包涵体形式存在于细胞质中。琼脂扩散试验测定兔抗SBC蛋白血清和猪抗SBC蛋白分别为1:16和1:8,间接ELISA测定效价分别为1:1280和1:640.Western blot结果证实重组SBC蛋白与兔抗SBC蛋白血清、猪抗SBC蛋白血清以及猪抗TGEV阳性血清均发生特异性反应。本研究建立了SBC的原核表达系统并证实重组SBC蛋白具有良好的免疫活性,为开展SBC的应用研究奠定了基础。
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