耐有机溶剂脂肪酶基因lipI的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

WANG Yan ¹王琰 ²张志敏 ²ZHANG Zhimin ¹WANG Jun ¹王军 ²ZHANG Kun ¹张琨 ²王燕 ²WAN Yi ¹万一 ²张继生 ³ZHANG jisheng ⁴Gao jianxin ⁵高建新 ⁶ZI Jing¹

扫码查看

作者信息

1. Shaanxi Province Institute of Microbiology,Shaanxi Xi’an 710043
2. 陕西省微生物研究所,陕西西安 710043
3. 西安新希望产业有限公司,陕西西安 710043
4. Xi’an Xin xiwang Bio-industry Company,LTD,Shaanxi Xi’an 710100
5. Xi’an center for Animal Disease Control and Prevention,Shaanxi Xi’an 710061
6. 西安市动物疫病预防控制中心,陕西西安 710061
折叠

摘要

为了实现耐有机溶剂脂肪酶基因的真核表达,参照GenBank公布的脂肪酶基因序列,设计简并引物,通过PCR扩增出G.geotrichum L-107的全长1692bp、编码563个氨基酸的脂肪酶基因lipI序列,其基因登录号为JX074060.利用Signal P3.0软件对lipI基因序列进行分析,将去除自身信号肽的成熟lipI基因克隆到诱导型表达载体pPIC9K上,构建胞外重组表达载体pPIC9K-lipI,发酵培养72h,发酵上清液中脂肪酶活力达到70U/mL,与野生型脂肪酶产生菌Galactomyces geotrichum L-107相比,脂肪酶活力提高7倍.获得的重组脂肪酶的最适温度和pH分别为40℃和6.5,在10％甲醇溶液中作用48h后仍然保持80％以上的酶活力.

关键词

耐有机溶剂脂肪酶基因/真核表达/克隆机理/毕赤酵母

引用本文复制引用

主办单位

中国农学会/中国畜牧兽医学会

会议名称

第六届中国畜牧科技论坛

会议时间

2013-11-01

会议地点

重庆

会议母体文献

第六届中国畜牧科技论坛论文集

页码

1005-1013

出版时间

2013

段落导航