摘要
从健康的斑节对虾幼体及其养殖环境中分离得到具有拮抗作用的新菌株SA18,利用经典引物扩增出其gyrb基因鉴定为橙色假交替单胞菌属,以11种弧菌,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等做对比发现SA18对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑菌活性,采用点种法测定抑菌谱,并用液体发酵法制备SA18胞外活性物质,杯碟法测定抑菌活性及发酵上清液的理化性质。结果表明:以2216E液体培养基体积与锥形瓶体积比约为30% pH7.83-7.98时28℃静置培养36h后开始得到有抑菌活性的发酵液,72h后活性达到最大,杯碟法抑菌活性检测得知,拮抗菌A18所产抑菌物质保存在发酵液中,进一步测定蛋白和去蛋白上清得出,抑菌物质为胞外蛋白.以60%-70%的硫酸铵浓度为最佳提取浓度.有较好的抗紫外照射和抗酸碱的性质,发酵液中的生物活性物质对热敏感,在30℃活性最大,随着温度上升,活性降低,上升到60℃活性丧失;对酸碱不敏感;经过蛋白酶K和胰蛋白酶的处理活性没有降低.用超滤透析葡聚糖凝胶层析等方法分离纯化,其中大分子的分子量在5000 Da以上。初步判定起抑菌作用的物质不是单一的,有可能为大分子的糖蛋白及部分的小分子物质起作用,纯化产物紫外吸收谱分析表明菌株SA18的胞外活性物质含蛋白质。