鸭TLR4基因可变剪接体的克隆、鉴定及组织表达分析

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中文摘要：选取同批出雏金定鸭(无母源抗体)，由国家级水禽种质资源基因库(泰州)提供，3日龄时选取体重相当，精神状态较好的80只雏鸭，即试验组(40只)、对照组(40只)。试验组注射0.4mL(0.5mg/mL)PolyI:C，对照组注射0.4mL生理盐水，隔离饲养，分别于0，4,8,12,24,36,48,72,96h分不同时间点采集胸腺、肝脏、脾脏、肺、肾脏等组织样(其中对照组脾脏取两份样品，一份用于基因克隆，另一份用于基因表达)和血样，样品于液氮中速冻-70℃冻存，提取血液及组织DNA用于PCR及RT-PCR 。以鸭脾脏组织cDNA为模板，将RT-PCR产物纯化后，转化克隆，随机挑取单个菌落进行菌液PCR，扩增得到了大小不等片段，经测序，一条为2532bp，与GenBank提交序列一致，定义为野生型(TLR4-a)，另一条为3367by，经比对，与鸭TLR4基因CDS相比，除包含相同的序列之外，还多出835by的碱基序列，定义为突变型(TLR4-b)，经多次测序确定为鸭TLR4基因的一种新的剪接体，并提交至GenBank。以鸭基因组DNA为模板，扩增鸭TLR4基因，经克隆测序。经过对TLR4-b序列结构进行研究发现，由于其保留了第一内含子(835bp)，因此TLR4-b在翻译过程中可能存在两种情况，其一是在291bp处提前终止(PTC)，仅编码76氨基酸残基;其二，发生整码突变(RFS)，从967bp开始翻译，造成1-77位的氨基酸的缺失，导致细胞膜上蛋白质多肤链第一个跨膜区片段缺失，究竟属于哪种情况还需通过蛋白功能和免疫原性实验进一步证实。

作者：

黄正洋、陈阳、李欣钰、甄霆、张扬、徐琪、赵文明、陈国宏

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作者单位：

扬州大学动物科学与技术学院,江苏扬州 225009

江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌330045

关键词：

雏鸭天然免疫基因可变剪接体克隆试验分离鉴定组织表达

主办单位：

中国畜牧兽医学会

会议名称：

第十六次全国家禽学术讨论会

会议时间：

2013-05-12

会议地点：

江苏扬州

会议母体文献：

第十六次全国家禽学术讨论会论文集

页码：

178

出版时间：

2013