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猪流感病毒H3N2核蛋白基因在大肠杆菌中的表达和鉴定

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目的:克隆、表达和鉴定猪流感病毒A/swine/Henar/1/2010(H3N2)的核蛋白基因(NP)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.方法:用RT-PCR扩增核蛋白基因,将其定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体并测序,在大肠杆菌Rosetta中表达,用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物.结果:所克隆的核苷酸片段与预期的核蛋白基因一致,编码498个氨基酸;构建的重组表达载体在大肠杆菌Rosetta中表达出了相对分子质量约60ku的重组核蛋白,且主要以包涵体形式存在.结论:克隆和表达了H3N2猪流感病毒核蛋白编码区基因,为获得大量NP蛋白用于制备多克隆抗体,以及为猪流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础.

朱春平、李燕、周云飞、吴亚丽、常婧竹、刘琳、高文明、李新生

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河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002

中国兽医药品监察所,北京100081

猪流感病毒H3N2 核蛋白基因 大肠杆菌 克隆表达 病原鉴定

河南省畜牧兽医学会

河南省畜牧兽医学会第八届会员代表大会暨2013年学术研讨会

2013-11-24

郑州

河南省畜牧兽医学会第八届会员代表大会暨2013年学术研讨会论文集

384-388

2013