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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白胞外区的串联表达及免疫原性分析
王寅彪 1乔松林 1万博 1鲍登克 1李任峰 1郭军庆 1张改平2
作者信息
- 1. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室 郑州 450002
- 2. 河南农业大学牧医工程学院 郑州450002
- 折叠
摘要
为建立基于GP5蛋白的PRRSV中和抗体检测方法,本实验通过基因合成技术将GP5蛋白的胞外区(GP5-ecto)进行串联合成,并将该串联基因克隆到pET28a载体上,在37℃培养含重组质粒pET28a-GP5-ecto的 E.coli BL21(DE3)细胞至OD600值为0.6-1.0时,以终浓度为0.5mM的IPTG诱导4小时后,重组GP5-ecto蛋白实现了高效表达.Western blot表明GP5-ecto蛋白能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应.Ni-NTA亲和层析纯化后,间接ELISA证实1∶400倍稀释的PRRSV阳性猪血清可检测到低达0.125μg/ml的GP5-ecto蛋白,表明GP5-ecto蛋白具有良好免疫原性.IFA试验证实GP5-ecto蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的阳性鼠血清能与天然PRRSV病毒发生特异性反应,进一步说明GP5-ecto蛋白具有良好免疫原性.本研究获得的GP5-ecto蛋白为建立检测PRRSV中和抗体的ELISA方法提供了材料.
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒/跨膜糖蛋白/串联基因/高效表达/免疫原性引用本文复制引用
主办单位
河南省农科院免疫学实验室会议名称
2013年全国动物疫病与食品安全博士后学术论坛会议时间
2013-11-01会议地点
郑州会议母体文献
2013年全国动物疫病与食品安全博士后学术论坛论文集页码
29-33出版时间
2013