摘要
本课题主要研究IGF-1在人NK细胞发育及功能中的调控作用及其机制,进一步完善NK细胞的基础生物学理论,并为NK细胞的免疫治疗提供实验基础.本课题首先分离新生儿脐带血CD34+造血干细胞(HSC),加入干细胞因子(SCF)、Fit3配体(Flt3L)和白介素-15(IL-15)进行长期培养(28天),进行体外NK细胞的分化及扩增,通过在该体系中加入IGF-1,探讨IGF-1对人NK细胞的发育及功能的影响及相关分子机制;其次分离正常人早孕蜕膜NK细胞,体外用IGF-1刺激,进一步阐明IGF-1对人NK细胞功能的影响及分子机制;此外,在实验中发现不同来源的NK细胞分泌不同水平的IGF-1,因此,利用IGF-1 siRNA及中和抗体阻断实验阐明内源性IGF-1对NK细胞功能的影响;为了揭示不同来源NK细胞差异表达内源性IGF-1的分子机制,利用microRNA芯片技术比较不同来源的NK细胞microRNA表达谱差异,筛选调控内源性IGF-1表达的microRNA,并验证目的microRNA通过靶向IGF-1调控NK细胞的功能.结果证明了生长因子IGF-1在人NK细胞中的一种新功能,即IGF-1可以促进人NK细胞的发育和杀伤功能,并深入阐述了其中的详细机制.此外,发现内源性IGF-1对NK细胞的杀伤功能至关重要;不同来源的NK细胞杀伤功能的差异可能来自于其内源性IGF-1的差异表达,NK细胞IGF-1的差异表达受miR-483-3p的调控,即miR-483-3p可以通过靶向IGF-1调控NK细胞的杀伤功能.本研究不仅为NK细胞发育及功能的调控提供了新的机制,还将对NK细胞的临床生物治疗有着重要意义.
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