目的:为了探讨高压氧治疗后CO中毒异常表达的基因,为HBO治疗CO中毒提供基因水平的依据。 方法:将Wistar大鼠染毒制成CO中毒模型,CO空气组暴露于空气中;COHBO组在CO暴露后,行HBO治疗.动物置于动物HBO舱内,关闭舱门,用纯氧洗舱,然后用15分钟纯氧加压至1.5ATA.稳压期间继续向舱内补充氧气,60分钟后,减压30分钟出舱,每天1次.14天后CO组大鼠出舱后和对照组大鼠即刻断头处死,取脑组织分离出海马组织,用Trizol法分别提取总mRNA,用琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量.预杂交后,标记探针,杂交,随后进行芯片扫描.芯片扫描与分析用ScanArray40OO扫描仪扫描芯片,GenePixPro3.0软件分析Cy3和Cy5 2种荧光信号的强度和比值.将cy5小于200的强度值以200取代.计算总数为n的有效基因(Selected=1,cy3、cy5值两者皆大于200或其一大于800.Ri=cy5/cy3在0.1～10之间)的Ri=cy5/cy3的自然对数值Ri'=In(Ri),算出Ri'的平均值R',均一化系数ND=EXP(R').将所有数据项的cy3标记强度乘上Normalize系数,得出调整后的cy3*.将所有cy3*小于200的强度值以200取代.本研究采用重复基因芯片的方法进行芯片假阳性率的控制,即分析的基因为两张芯片同时为阳性的基因,将只有一个有效数据的阳性基因或只有一个数据为阳性的基因,从总的阳性基因中剔除。 结果:1.总RNA抽提结果符合芯片杂交检验的要求,2.筛选出Ratio大于2或小于0.5的数据,在CO空气组、COHBO组中都出现差异表达的数据项,共13项.这些数据所代表的基因在与两种探针杂交时表现出较大的差异,且上下调趋势一致,程度相似。 结论:CO中毒HBO治疗后上调的基因有4条,下调的基因有9条;CO中毒后相关基因表达异常可持续至少2周以上。
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