鸡TLR-7蛋白的原核表达和多克隆抗体制备及其应用

扫码查看

原文链接

NETL

中文摘要：本项目以10日龄海兰褐蛋鸡肝脏为实验材料，应用分子生物学和免疫学等技术，通过总RNA提取、TLR-7蛋白基因扩增和序列测定，并将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)后经酶切鉴定，成功获得高效表达鸡TLR-7蛋白的重组质粒pET-TLR7载体，并对诱导表达过程进行优化，结果发现通过IPTG在37℃诱导6h时蛋白表达量最大。经Westem Blot鉴定后，成功获得了40kd的蛋白条带，与预期的目的蛋白大小一致，从而成功获得目的蛋白。对上述已获得的目的蛋白采用蛋白浸提法从SDS-PAGE胶中纯化回收融合蛋白，并通过透析对目的蛋白进行复性。用佛氏（完全、不完全）佐剂乳化纯化复性目的蛋白后，分别经3次对家兔进行免疫，获得多克隆抗体经间接酶联免疫吸附试验检测法测定抗体效价，从而获得了效价为1：64000的兔抗鸡TLR-7蛋白的多克隆抗体。应用上述抗体，通过免疫组织化学方法，对已知IBDV感染雏鸡的组织器官的TLR-7蛋白表达量做了定性测定，结果发现，IBDV感染雏鸡的组织器官中TLR-7蛋白表达量较对照雏鸡明显升高。表明所获得的原核表达重组鸡TLR-7蛋白具有良好的免疫原性，可诱导兔产生高效价的多克隆抗体，并能够有效识别天然TLR-7蛋白。为今后分子病理学研究提供了新思路和理论基础。

作者：

于志强、刘超男、郑世民、李岩

展开 >

作者单位：

东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030

关键词：

鸡 Toll样受体-7蛋白原核表达多克隆抗体

主办单位：

中国畜牧兽医学会

中国病理生理学会

会议名称：

2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会

会议时间：

2012-07-01

会议地点：

北京

会议母体文献：

2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会论文集

页码：

出版时间：

2012