珍稀濒危植物钟萼木ISSR-PCR反应体系的建立和优化

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中文摘要：为建立适用于钟萼木的ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat,ISSR)反应体系,采用单因素法筛选出影响ISSR-PCR的主要因素的最适宜值,建立了优化的钟萼木ISSR-PCR反应体系和扩增程序.结果表明,优化的反应体系为:反应体积20 μ1,Mg2+(10 mmol/L)2 mmol/L,引物(10 μmol/L)0.5μmol/L,dNTP(10 mmol/L)0.6 mmol/L,模版DNA(20 ng/μl)16 ng,Taq酶(5U/μl) 1.5 U,用灭菌的双蒸水补齐.优化的扩增体系为:94℃预变性5 min,然后进入38个循环,94℃变性45 s,52～56℃(各引物退火温度不同)退火60 s,72 ℃延伸90 s,循环完毕后于72℃延伸10 min,最后保存于4℃.

作者：

Lin Guofeng、林国锋、Chen Yitang、陈义堂、Huang Jianlan、黄建兰、Zhang Xiaoping、张晓萍、Chen Shipin、陈世品

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作者单位：

Forestry College of Fujian Agricalture and Forestry University,Fuzhou 350002

福建农林大学林学院,福州350002

Fuzhou Botanical Garden,Fuzhou 350000

福州植物园,福州350000

Minjiangyuan Nature Reserve,Jianning 354500

福建省闽江源国家级自然保护区,建宁354500

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关键词：

钟萼木简单序列重复区间扩增多态性聚合酶链反应树种保护

主办单位：

中国植物学会

中国环境科学学会

会议名称：

2012年中国植物园学术年会

会议时间：

2012-11-01

会议地点：

重庆

会议母体文献：

2012年中国植物园学术年会论文集

页码：

117-124

出版时间：

2012