鸡IL-10原核表达抗血清用于体内实验的初步分析

HAN Ling-xia ¹韩凌霞 YANG Liu ¹杨柳 PENG Wei-yu ¹彭蔚宇 WANG Li-ting ¹王丽廷 WANG Xing-tong ¹王兴童 CHEN Hong-yan ¹陈洪岩

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作者信息

1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,150001
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摘要

目的：获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性. 方法：采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10.转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清.分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性. 结果：构建成功chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,制备了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应. 结论：原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测.

关键词

鸡病毒病/鸡白介素-10/原核表达/鼠抗血清/体内实验

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主办单位

天津实验动物学会北京实验动物学会河北省实验动物学会内蒙古实验动物学会

会议名称

2016第十四届中国北方实验动物科技年会

会议时间

2016-09-08

会议地点

天津

会议母体文献

2016第十四届中国北方实验动物科技年会论文集

页码

370-377

出版时间

2016

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