摘要
目的：采用计算机辅助软件设计联合体外斑点杂交筛选能与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ftsZ基因mRNA紧密结合的高效反义寡核苷酸序列. 方法：利用计算机辅助软件(RNA Structure5.0)对ftsZmRNA进行二级结构分析计算,并进行自由能计算,在膨胀环,发卡等不稳定的结构区域设计10条反义寡核苷酸序列,另设计一条与ftsZ基因上的一段碱基序列完全相同的寡核苷酸序列作为阴性对照,合成反义探针,和体外转录并且用地高辛标记的ftsZmRNA进行斑点杂交,根据信号的强弱,筛选出高效的反义寡核苷酸序列. 结果：体外斑点杂交实验结果显示,计算机软件设计的11条反义寡核苷酸序列中,其中有6条显示不同程度的杂交信号,1条正义序列未显示任何信号. 结论：计算机辅助软件联合体外斑点杂交能够减少反义核酸设计的盲目性,为体外可靠、快速、高通量筛选高效反义寡核苷酸序列提供了一种有效的方法,并且为筛选所有基因高效反义序列搭建了一个平台.
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