原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)是生殖母细胞的前体细胞,作为一种多能干细胞,具有与胚胎干细胞相似的形态及分化潜能,能在体外进行培养、传代,并在一定条件下保持未分化状态及多能性.现阶段PGCs的体外培养体系中往往存在饲养层细胞和血清,为后期研究造成了困难和混淆.为建立粤黄鸡原始生殖细胞(PGCs)的体外无饲养层培养体系,给体外研究禽类PGCs增殖调控机制打下良好的基础,本研究通过改进培养体系成分分离纯化PGCs并进行体外培养.结果显示,所得无饲养层培养的PGCs直径为6～8μm,生长曲线呈现"S"形,群体倍增时间(3.75±0.15)d,表明PGCs具有良好的增殖生长状态;对分离纯化的PGCs特异性基因胚胎阶段特异性表面抗原(stage specifi embryonic antigen-1,SSEA-1)和类无精症缺失基因(deleted in azoospermia-like,DAZL)进行免疫荧光鉴定,结果显示二者在PGCs均有表达,经化学免疫染色的细胞可观察到绿色的荧光;将无饲养层培养的PGCs用PKH26标记,注射到孵化至17HH-20HH受体鸡胚的背主动脉中,继续孵化至第5.5d,结果显示,分离纯化并通过PKH26标记的鸡胚血液PGCs仍然具有PGCs的特性,可随鸡胚的血液循环定殖于鸡胚性腺中.本研究优化了PGCs体外培养的条件,建立无饲养层无血清培养体系,为家禽PGCs应用于现代保种技术、转基因技术以及家禽的发育生物学等研究领域,提供了重要的技术支持.
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