摘要
α-1,2-甘露糖转移酶Mnn2,参与细胞壁中甘露糖糖链的加工和延伸,其缺失与过表达对细胞壁的组成和比例可能有影响.本研究以细胞壁蛋白GCW61为锚定蛋白的pichia pastoris表面展示脂肪酶Candida antarctica lipase B(CALB)重组工程菌为出发菌株,构建了Mnn基因缺失菌株GS115/Calb-Gcw61-△Mnn2;同时将Mnn2基因克隆到pPICZA载体,构建pPICZA-Mnn2过表达重组质粒,转化毕赤酵母,经筛选获得构建了GS115/pPICZA-Mnn2的pichia pastoris表面展示脂肪酶重组菌株.重组菌经250mL摇瓶发酵72h,Mnn2基因缺失菌株比未改造菌株提高了17.6％,比过表达Mnn2基因的脂肪酶展示菌株提高36.4％,菌体的展示酶活最高达1800U/g.流式细胞仪检测发现,菌株荧光量:敲除菌株＞对照菌株＞过表达菌株,说明表面展示脂肪酶展示量的增加.通过RT-PCR对CALB的表达水平鉴定,发现CALB基因在缺失、对照和过表达Mnn2基因的酵母菌株中转录水平相同,因而α-1,2-甘露糖转移酶Mnn2的缺失有助于提高酵母表面展示脂肪酶的效率.
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