山核桃干腐病菌环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测体系的建立

TONG Qi ¹童琪 ¹ZHANG Jia-xing ¹张佳星 ¹ZHANG Yu ²张宇 ³ZHANG Chuan-qing 张传清 WU Ying-ying 吴莹莹 WANG Ye-qing 王叶青

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作者信息

1. 浙江农林大学植物保护系,浙江临安311300
2. 浙江农林大学林业与生物技术学院,浙江临安311300
3. 浙江农林大学农业与食品科学学院,浙江临安311300
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摘要

为了建立一种能够快速、准确、高效地检测山核桃干腐病菌的技术,本研究根据茶蔗子葡萄座腔菌的β-tubulin基因序列设计外引物、内引物和环引物,并对扩增体系和条件进行了优化、并分析其特异性和灵敏度.结果使用羟基萘酚蓝(HNB)作为反应指示剂,反应体系(Bst DNA聚合酶0.16U/μL,外引物F3和B3均为0.2μmol/L,内引物FIP和BIP均为1.6μmol/L,环引物LB为0.8μmol/L,Mg2+为4mmol/L,dNTP为1mmol/L,甜菜碱Betaine为0.6mmol/L)在等温(64℃)条件下反应1h能特异性检测山核桃干腐病菌:以山核桃干腐病菌DNA为模板的反应液呈阳性(变为蓝色),而其余的病菌均为阴性(仍为紫色),该技术的最低检测限为1pg/μL.

关键词

山核桃干腐病/葡萄座腔菌/快速检测/环介导等温扩增技术

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主办单位

全国农药学科教学科研研讨会理事会

会议名称

第十六届全国农药学科教学科研研讨会

会议时间

2018-08-15

会议地点

河北保定

会议母体文献

第十六届全国农药学科教学科研研讨会论文集

页码

87-91,100

出版时间

2018

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