摘要
目的：观察黄芩苷对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子(NF-κB)信号通路的调控,探究黄芩苷抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制. 方法：体外细胞实验中,将RAW264.7小鼠巨噬细胞随机分为4组,即对照组、黄芩苷组、康士得组以及LY294002组.分别用黄芩苷含药血清、Akt抑制剂康士得及PI3K抑制剂LY294002,体外处理RAW264.7细胞48h,透射电镜观察巨噬细胞自噬体的变化,免疫荧光法及Western blotting法检测微管相关蛋白LC3-Ⅱ表达,Western blotting法检测Akt、p-Akt的表达水平.体内实验中,将ApoE(-/-)小鼠随机分为5组,即对照组、模型组、黄芩苷组、康士得组、LY294002组,检测ApoE(-/-)小鼠血脂四项,采用油红O染色观察ApoE(-/-)小鼠主动脉病理形态;采用HE染色检测各组ApoE(-/-)小鼠主动脉横截面病理损伤程度;检测ApoE(-/-)小鼠主动脉血管内皮依赖性舒张功能的变化;采用免疫组化检测炎症因子(IL-6、IL-1B、TNF-a)和粘附因子(ICAM-1)蛋白表达;Western blotting法分别检测ApoE(-/-)小鼠主动脉组织中Akt、NF-KB p50、NF-κB p65、Cav-1蛋白的表达. 结果：体外实验结果显示,与对照组比较,黄芩苷含药血清组和各抑制剂组细胞透射电镜下观察到自噬体明显增多,LC3-Ⅱ蛋白的表达水平明显上调(P＜0.05),p-Akt蛋白表达水平明显减少(P＜0.05),Akt蛋白表达均未见显著差异.体内实验结果显示,与模型组比较,各组TC、TG、LDL-C水平降低(P＜0.05),HDL-C水平升高(P＜0.05);ApoE(-/-)小鼠主动脉油红O染色和HE染色结果显示,与模型组比较,黄芩苷组ApoE(-/-)小鼠斑块减小,并较各抑制剂组轻;ApoE(-/-)小鼠内皮依赖性舒张功能检测结果显示,与模型组比较,康士得组、黄芩苷组、LY294002组ApoE(-/-)小鼠内皮依赖性舒张功能均显著增加(P＜0.05);免疫组化检测炎症因子及粘附因子表达显示,与模型组比较,黄芩苷组ApoE(-/-)小鼠主动脉组织IL-6、IL-1B、TNF-a和ICAM-1蛋白表达量均降低(P＜0.05);Western blotting结果显示,与模型组比较,黄芩苷组ApoE(-/-)小鼠主动脉组织Akt、NF-κB p50、NF-κB p65、Cav-1蛋白表达量均降低(P＜0.05). 结论：黄芩苷抑制动脉粥样硬化斑块的形成机制与调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路,促进巨噬细胞自噬,抑制炎症反应有关.
NETL