首页|甘蔗ABA生物合成关键酶SoNCED基因克隆及表达分析

甘蔗ABA生物合成关键酶SoNCED基因克隆及表达分析

扫码查看
原文链接
  • NETL
目的：克隆甘蔗体内9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase,NCED)基因,分析其基本生物学信息及在逆境胁迫下的表达分析,为进一步探讨SoNCED基因在甘蔗脱落酸(ABA)生物合成途径中的作用提供理论依据. 方法：以甘蔗品种桂糖21号为材料,待蔗苗长至5～6片叶时分别进行干旱、低温、高盐和氧化胁迫处理,利用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA未端快速扩增(RACE-PCR)克隆SoNCED基因,应用生物信息学方法对获得的氨基酸序列进行分析,构建原核表达载体并进行目的蛋白的诱导表达,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析SoNCED基因在受到不同逆境胁迫时的表达情况. 结果：克隆获得的SoNCED基因(GenBank登录号JQ314108),cDNA全长为2521bp,包含1个1827bp的开放阅读框(ORF),编码608个氨基酸.多重序列比对及系统发育进化树分析结果表明,SoNCED基因编码的氨基酸序列与其他植物有一定的相似性,尤其与禾本科C4植物高粱和玉米的同源性最高,均达96％.成功构建SoNCED基因的原核表达载体pET-SoNCED,且通过IPTG诱导时可得到约66.0kD的蛋白,确定该蛋白为SoNCED基因的表达蛋白.qRT-PCR结果分析表明,SoNCED基因在干旱、低温、高盐和氧化胁迫下均能诱导表达,其中氧化胁迫下其表达量在6h时达峰值,其他胁迫方式下其表达量在12h时达峰值. 结论：成功克隆获得甘蔗SoNCED基因,并从不同逆境下的表达情况推测该基因在甘蔗体内参与了干旱、低温、高盐和氧化等非生物胁迫的调控过程.

TAN Qin-liang、谭秦亮、PAN Cheng-lie、潘成列、YANG Li-tao、杨丽涛、LI Yang-rui、李杨瑞、OU Ke-wei、欧克纬、ZHU Peng-jin、朱鹏锦

展开 >

广西亚热带作物研究所,南宁530001

广西大学农学院,南宁530004

亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁530004

广西田园生化股份有限公司,南宁530007

中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁530007

展开 >

甘蔗 分子育种 脱落酸 生物合成 SoNCED基因 基因克隆 基因表达

广西甘蔗学会

广西甘蔗学会2017年年会暨学术交流会

2017-07-01

广西防城港

广西甘蔗学会2017年年会暨学术交流会论文集

1-8

2017