家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂2(Bmserpin2)抑制酚氧化酶原的激活和抗菌肽的表达

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中文摘要：丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白是昆虫中调控自身免疫反应的重要蛋白酶抑制剂.本研究旨在研究家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂2(Bmserpin2)在家蚕2个重要的自身免疫通路,即酚氧化酶原激活通路和革兰氏阳性菌诱导抗菌肽的Toll通路的调控作用.通过Primer5软件合成荧光定量引物,利用RT-qPCR研究目的基因在家蚕5龄第3天的的组织表达模式.通过扩增Bmserpin2基因片段,构建质粒,利用原核表达系统诱导目的蛋白表达,采用镍柱纯化重组蛋白,并通过公司制备抗体.利用纯化后的重组蛋白与不同蛋白酶反应,通过OD436nm来检测Bmserpin2对酶的活性影响.注射5龄第3天的家蚕Bmserpin2重组蛋白,通过测量OD490来检测目的蛋白对PPO活性影响.通过微球菌诱导5龄第3天的家蚕产生抗菌肽和注射Bmserpin2重组蛋白,并通过RT-qPCR来检测抗菌肽gloverin2和moricin表达量来研究Bmserpin2蛋白对Toll通路中的调控作用.成功构建pET-28a-Bmserpin2质粒并表达纯化有活性的目的蛋白,并进行纯化.通过与不同蛋白酶反应得出其具有生物学活性并且表现出催化特异性.基因表达模式显示Bmserpin2在中肠和血液中表达量最高.幼虫期注射目的蛋白后发现Bmserpin2能有效抑制PPO活性.利用微球菌诱导抗菌肽实验表明Bmserpin2能有效抑制gloverin2和moricin的表达.Bmserpin2主要在家蚕免疫组织中发挥作用,同时可以调控家蚕的2个重要自身免疫通路,即负调控酚氧化酶原激活通路和革兰氏阳性菌诱导抗菌肽的Toll通路.本研究为下一步阐明Bmserpin2调控家蚕自身免疫反应的机理打下基础.

作者：

LI Bing、李冰、SUN Fan、孙帆、TAO Shan-Shan、陶姗姗、Ye Chong-Jun、叶崇军

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作者单位：

安徽省农业科学院蚕桑研究所,安徽合肥 230061

关键词：

家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂酚氧化酶原抗菌肽蛋白表达免疫调控

主办单位：

山东蚕学会

会议名称：

北方蚕业科研协作区第三十一届学术年会

会议时间：

2019-10-16

会议地点：

山东烟台

会议母体文献：

北方蚕业科研协作区第三十一届学术年会论文集

页码：

83-94

出版时间：

2019