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鉴别禽致病性大肠杆菌与禽非致病性大肠杆菌多重PCR检测方法的建立及初步应用

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为建立一种快速鉴别禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)和禽非致病性大肠杆菌(Avian non-pathogenic Escherichia coli,ANPEC)的多重PCR检测方法,本研究针对APEC的iss、cvaC、irp2、iucD、iroN和tsh共6个毒力基因的序列进行分析,分别设计合成6对特异性引物,通过正交组合法优化引物比例和梯度法确定最佳退火温度,并进一步完善了方法的敏感性、特异性和判定标准,建立了一种快速灵敏检测APEC的多重PCR检测方法,并初步应用该方法对本实验室102株大肠杆菌样本鉴定和分群.结果显示:该多重PCR方法对菌液最低检测浓度为5×107cfu/mL;对其他种属的4株革兰氏阳性菌和5株革兰氏阴性菌无扩增.检测实验室保存的鸭源APEC和ANPEC各10株,通过比较两者所含毒力基因的分布情况及数量,建立多重PCR判定标准即所含毒力基因数大于等于3者为APEC阳性菌株.初步应用该方法检测实验室分离保存的23株APEC和79株ANPEC,同时进一步验证了其准确性.结果表明:APEC检出率为100％,ANPEC的检出率亦为100％.以上结果充分说明本研究建立的多重PCR方法特异性强、灵敏度高、简便快捷,可进一步应用于禽类的APEC和ANPEC快速鉴别诊断和APEC的分子流行病学调查.

WANG Yi-ping、王怡平、SUN Chang、孙畅、ZHAO Li-li、赵丽丽、CHEN Hong-yan、陈洪岩

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