摘要
目的:探讨DDX46对结肠癌细胞的电离辐射敏感性的影响及其作用机制. 方法:DDX46基因RNA干扰慢病毒转染的SW480细胞为实验组,空载质粒慢病毒转染的SW480细胞为对照组.两组细胞转染72h后,分别进行0和4GyX射线照射,采用CCK8方法检测两组的细胞活力;实验组联合4Gy X射线照射24h后,检测细胞γ-H2AX foci数量以及DNA损伤修复通路关键蛋白的表达水平,确定DDX46与辐射诱导的DNA损伤修复的关系. 结果:照射24h后,实验组4GyX射线照射条件下的细胞活力比实验组未照射时降低(15.02±3.92)％,(t=-4.696,P＜0.05);实验组4Gy X射线照射条件下比对照组4Gy X射线照射时降低(17.43±1.83)％,(t=4.844,P＜0.05);而对照组4Gy X射线照射条件下与对照组未照射之间比较差异无统计学意义(t=-2.236,P=0.089);4Gy X射线照射后24h,实验组γ-H2AX foci数量相比于对照组增加了(43.03±17.6)％,两者差异相比有统计学意义(t=-3.108,P＜0.05);Western blot的结果显示,4GyX线照射24h后,相比于对照组,实验组ATM的蛋白水平显著升高(t=7.53,P＜0.05),而ATM的活性形式p-ATM以及ATM的下游靶蛋白Rad50的蛋白水平则明显降低(t=4.26,P＜0.05、t=4.26,P＜0.05),同时γ-H2AX的蛋白表达水平也有一定程度的升高(t=-3.091,P＜0.05);DNA-PK在两组细胞内的蛋白水平变化不大. 结论:沉默DDX46可以提高结肠癌细胞系SW480的辐射敏感性,其机制可能是DDX46表达沉默抑制结肠癌细胞系SW480中ATM的活化,从而抑制辐射诱导的DNA损伤的修复,提高SW480的辐射敏感性.
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