摘要
本文以传统中药柴胡为研究对象，收集了24个样品。采用高效液相色谱法对柴胡中皂苷和黄酮类成分进行HPLC指纹图谱分析，获取了反映该药材皂苷和黄酮类化学成分的化学数据。用系统聚类分析将24个样品按质量分为推荐品、非推荐品和其他品种柴胡三个等级；选择推荐品建立柴胡HPLC指纹图谱的共有模式，分别以夹角余弦、相关系数和欧氏距离为测度，计算样品与共有模式的相似度，根据相似度结果制定评价标准。采用毛细管气相色谱法对柴胡的挥发性成分进行GC指纹图谱分析，获取了反映该药材挥发性化学成分的化学数据。用系统聚类分析将24个样品按质量分为推荐品、非推荐品(包括劣品和伪品)和其他品种样品；选择推荐品药材建立柴胡GC指纹图谱的共有模式，分别以夹角余弦、相关系数、欧氏距离为测度，计算样品与共有模式的相似度，根据相似度结果制定评价标准。 两张色谱指纹图谱的相似度评价标准均为：以夹角余弦和相关系数为测度，相似度值若低于0.85，判为非推荐品或其他品种的柴胡药材，若高于0.85，再以欧式距离为测度，相似度值高于0.90则判为推荐品，否则判为非推荐品。 采用气相色谱质谱联用法、Kovats保留指数定性法和已知物对照法对10个品种柴胡挥发油的化学成分进行分析，鉴定了50种挥发性化学成分。采用气相色谱质谱联用法和已知物对照法对北柴胡脂肪油化学成分进行分析，鉴定了8种脂肪油化学成分。 采用毛细管气相色谱法分别对挥发油的6个指标成分正己醛、正庚醛、(E，E)2，4-癸二烯醛、(E)2-庚烯醛、2-戊基呋喃、(E)2-壬烯醛和脂肪油的4个指标成分棕榈酸、棕榈油酸、油酸和亚油酸进行定量测定。色谱柱分别为DB-1，HP-5和DB-WAX毛细管气相色谱柱，规格均为30m×0.25ram×0.25μm，检测器均为氢火焰离子化检测器。正己醛、正庚醛、(E，E)2，4-癸二烯醛分别在0.1424～2.8488 mg·mL<'-1>(r=0.9996)，0.0266,、0．5320 mg-mL<'-1>Z(r=0.9998)，0.0336、0.6728 mg·mL<'-1>(r=0.9997)范围内呈良好线性关系，回收率分别为101.5％(RSD=2.9％)、108.8％(RSD=3.5％)和100.9％(RSD=4.1％)；(E)2-庚烯醛、2-戊基呋喃、(E)2-壬烯醛分别在26.8～1072μg·mL<'-1>(r=0.9996)、6.46～1292μg·mL<'-1>(r=0.9994)，7.82～1564 μg·mL<'-1>t(r=0.9998)范围内呈良好线性关系，回收率分别为99.8％(RSD=4.2％)、101.6％(RSD=5.2％)和97.0％(RSD-3.8％)；榈酸、棕榈油酸、油酸和亚油酸分别在0.1043～3.130 mg·mL<'-1>(f=0.9998)、0.0400～0.800 mg·mL<'-1>(r=0.9996)，0.0917～2.721 mg·mL<'-1>(r=0.9998)和0.1127～6.760 mg·mL<'-1>(r=0.9998)范围内呈良好线性关系，回收率分别为99.1％(RSD=3.2％)、100.5％(RSD=2.8％)、99.5％(RSD=3.7％)和100.9％(RSD=2.8％)。 建立了同时测定柴胡皂苷a和d含量的高效液相色谱法，色谱柱为 Hypersil C<,18>柱 (250mmx4.6mm i.d，5μm)，流动相为乙腈∶水∶甲酸(37.5∶62.5∶1％v／v)，检测波长250nm， 线性范围分别为4.90～98.0μg·mL<'-1> (r=0.9996)和3.55～71.0μg·mL<'-1>(r=0.9999)，平均回收 率分别为98.3％(RSD=3.0％)，96.5％(RSD=1.8％)：建立了同时测定柴胡中芦丁和槲 皮素含量的高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil C<,18>(200mmx4.6 mm i.d.，5μm)，流动 相为甲醇∶水∶磷酸(41∶59∶0.05 v／v)，检测波长370 nm，线性范围分别为0.0610～0.9760 mg·mL<'-1>(r=0.9999)，0.0082～0.1640 mg·mL<'-1>(r=0.9996)：平均回收率分别为98.7％(RSD =2.0％)，99.2％(RSD=2.4％)。 利用正交试验，对柴胡皂苷、挥发油、黄酮类成分的提取工艺，柴胡皂苷a和d的 结构转化方法和脂肪油的衍生化工艺进行优化。柴胡皂苷的最佳提取工艺是15倍量的甲 醇，回流提取3次，每次1h：挥发油的最佳提取工艺是用pH=1，NaCl浓度为lO％的水 溶液浸泡10h，提取时间为6h；黄酮的最佳提取工艺为lO倍量的提取溶剂，超声提取2 次，每次20 min；柴胡皂苷a和d结构转化的最佳反应条件为加入8％HCI的50％甲醇 溶液，置于25℃下反应14小时；脂肪油的最佳衍生化条件为加入2％NaOH甲醇溶液， 加热回流30 min，再加入2mL三氟化硼．乙醚溶液反应5 min。 制备了17个柴胡挥发油样品，对其解热，镇痛和抗炎药理作用进行了研究，获得 药理数据；采用气相色谱质谱联用法对17个样品进行分离分析，得到45个色谱峰的化 学数据；将化学数据和药理数据组成原始数据矩阵，进行相关分析和回归分析。综合回 归分析和相关分析的结果，从45个色谱峰中选取了19个与药理数据密切相关的色谱峰， 确定为柴胡挥发油的药效物质基础。其中X<,2>、X<,6>、X<,7>、X<,8>、X<,20>、X<,27>号峰经质谱和对照 品对比鉴定为正己醛、正庚醛、(E)2-庚烯醛、2-戊基呋喃、(E)2-壬烯醛和(E,E)2,4-癸二 烯醛，被确定为柴胡挥发油的质量控制指标。 首次建立了测定大鼠血浆中柴胡皂苷b<,2>(SSb<,2>)和柴胡苷元D(SGD)含量的HPLC 方法，以白杨素为内标，甲醇沉淀蛋白后，用乙酸乙酯将待测物提取出来，取有机相分 析。SSb<,2>、SGD分别在0.406-24.36μg·mL<'-1>和0.30-12.0μg·mL<'-1>范围内线性良好，方法 定量限分别为0.406和0.30μg·mL<'-1>，SSb<,2>的日内RSD<4.7％,日间RSD<8.2％,RE在-4.7％ ～9.5％之间，提取回收率高于73.9％；SGD的日内RSD<8.4％,日间RSD<13.7％，RE在 -1.4％～1.5％之间，提取回收率高于87.9％。采用本法研究了灌胃给予大鼠柴胡总皂苷 后SSb2和SGD的药物动力学行为。灌胃给予大鼠柴胡总皂苷后，检测到了SGD完整的血药浓度-时间曲线，而且在给药后72h内仍然能检测到SGD，但是只在6h内检测到微量的ssB<,2>，未检测到完整的血药浓度．时间曲线。SGD在1l.3 h左右达峰，C<,max>约为4.19 μg·mL<'-1>。其AUC<,o-t>、AUC<,o-∞>分别为120.8、129.4 μg·h·L<'-1>，对消除相末四点甩半对数做图法计算to.5为15.8 h。本研究的结果表明灌胃给予大鼠柴胡总皂苷后，SSb<,2>代谢为SGD，SGD 的消除由于其他化学成分的影响变得缓慢，所以在72 h 仍可以检测到’SGD。首次建立了测定大鼠血浆中正己醛浓度的GC-MS分析法，以正癸烷为内标，用乙酸乙酯将待测物提取出来，取有机相分析。正己醛在0．358-71.5μg·mL<'-1>范围内线性良好，方法定量限为0.358 μg·mL<'-1>，日间RSD≤8.9％，日内RSD≤5.9％，RE在-6.2％~0.1％之间，提取回收率不低于78.4％。采用本法比较研究了股静脉注射给予大鼠柴胡挥发油和正己醛单体后正己醛的体内药物动力学行为，分别测定了给药后正己醛的血药浓度-时间曲线，计算其相应药物动力学参数。结果表明股静脉给予大鼠正己醛后，血浆中正己醛的最大血药浓度为6.98μg·mL<'-1>，生物半衰期只有29.32 min，AUC<,o-∞>为96。62μg·min·L<'-1>；股静脉给予大鼠柴胡挥发油后，血浆中正己醛的最大血药浓度为12.02μg·mL<'-1>，半衰期为42.06 min,AUC<,o-∞>为137.84 μg·min·L<'-1>，这表明股静脉给予大鼠柴胡挥发油同给予正己醛单体相比，大鼠血浆中正己醛浓度明显升高，消除半衰期和 AUC值显著延长，两组药动学参数间有显著性差异(P<O.05)。
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