摘要
霍山石斛是我国最早有记载的石斛类中药材,其药用价值为人们所共识.研究发现,多糖是霍山石斛中最主要的活性成分之一.本文以霍山石斛为研究对象,优化了霍山石斛多糖的提取工艺,纯化分离了多种多糖组分,重点研究了霍山石斛多糖对人胃腺癌细胞SGC-7901的抑制作用,探讨了多糖抗肿瘤作用与肿瘤相关基因之间的相关性. 通过单因素实验结合Box-Behnken设计和响应曲面分析,建立了提取温度、提取pH和提取时间与霍山石斛多糖提取率间的数学模型:Y=0.175767+0.023363X<,1>+0.013662X<,2>-0.032858X<,1>,<'2>+0.019X<,1>X<<2>-0.026308X<,2>,<'2>.霍山石斛多糖的最佳提取优化工艺条件为:提取温度69.4℃,时间1.57h,pH值5.9,料液比1:20,提取2次.在此条件下实际值与模型值的吻合度达到98.4%. 两种脱蛋白方法和五种脱色素方法的考察得出,Sevag法虽然比TCA法脱蛋白效果略差,但是对多糖总量保持较好,是较好的脱蛋白方法:DEAE-纤维素脱色法脱色率高,多糖损失率比较小,虽然DEAE一纤维素的价格较昂贵,但是其回收处理比较方便,是较佳的脱色方法. 水提获得的霍山石斛粗多糖HDP通过DEAE-纤维素离子交换色谱分离得到多糖HDP-1,HDP-2,HDP-3,HDP-4,HDP-5,HDP-6.其中抗胃癌活性最强的多糖HDP-2经Se:phacryl-200HR色谱后,又获得HDP-2-A和HDP-2-B两种多糖组分,经UV扫描不含蛋白. 多糖组份HDF-2对胃腺癌细胞SGC-7901的作用在荧光定量RT-PCR下检测得到,多糖组份HDP-2明显下调胃腺癌细胞SGC-7901中原癌基因c-myc的表达,仅为对照组表达率的42.34%.同时大幅提高肿瘤抑制基因野生型p53的表达,为对照组表达率的2.042倍.
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