摘要
近年来,由于设施辣椒栽培面积的连年扩大,轮作倒茬越来越困难,辣椒根腐病已经成为我国北方设施辣椒可持续发展的限制性因子之一.本论文针对辣椒根腐病病原不清,防治药剂不得当引起防效差的问题,开展了设施辣椒根腐病病原鉴定及检测技术研究.1.对来自北京阳坊、山东寿光、辽宁瓦房店等地不同辣椒产区的根腐病病原进行了分离培养和鉴定,根据其形态特征、培养性状、生化特性以及致病性测定结果,将该病原菌鉴定为辣椒疫霉Phytophthora capsici Leonion.病原菌具孢子囊,形态变化大,椭圆形、近球形、卵形或不规则形,孢子囊平均大小为(11.8～46.6)×(11.2～24.5)μm,长宽比为1.4～1.8;乳突明显,呈半球形,一般单乳突,偶见双乳突,乳突长为1.7～5.9μm;病原菌不产生厚垣孢子;除辣椒外,人工接种还可侵染黄瓜、番茄、茄子,不侵染油菜和白菜;对孔雀石绿不敏感,能够利用淀粉.2.运用免疫学技术,建立了检测辣椒疫霉的间接ELISA(I-ELISA)和斑点ELISA(Dot-ELISA)方法.本研究首先以辣椒疫霉菌体可溶性蛋白作为免疫原,通过免疫家兔制备了高效价的抗血清,并进一步提取和纯化了抗体IgG.在实验室条件下从样品稀释度、抗体孵育时间、抗体工作浓度、酶标二抗孵育时间、酶标二抗工作浓度等几个方面对I-ELISA和Dot-ELISA检测方法进行了实验条件的优化.结果显示,在间接ELISA法中,最佳封闭液及封闭时间分别为0.5%的BSA和37℃2h;抗体最佳工作浓度及孵育时间分别为16.67μg/mL和37℃ 1.5h;酶标二抗的最佳工作浓度及孵育时间分别为800×和37℃2h;底物显色的最佳作用时间为37℃15min.在Dot-ELISA法中,抗体最佳工作浓度为8.69μg/mL,抗原抗体间的最佳作用时间为37℃1.5～2.0h,酶标二抗的最佳工作浓度和孵育时间分别为600倍和37℃1.5h.以上两种检测方法的稳定性好、特异性强,检测的灵敏度高,可用于田间实际检测. 本研究首次鉴定了引起我国北方地区辣椒根腐病的病原为辣椒疫霉,为正确用药、合理防治上述地区辣椒根腐病提供了理论依据;同时本研究建立的辣椒疫霉检测方法,为该地区设施辣椒根腐病的早期诊断与防治、病害的监测和预测预报提供了一条行之有效的技术手段.
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