摘要
有机磷化合物在农业生产中作为农药广泛使用,在使用的同时也造成火面积的污染.目前尚未有经济、有效的污染治理与修复手段. 本研究在烟草中表达细菌来源的有机磷降解酶基因ophc2.构建了该基因的植物表达载体,获得的ophc2最终表达框,包含CaMV 35S启动子序列、extensin序列、ophc2有机磷降解酶编码基因和FIOS终北子序列,命名为pBl-E-ophc2.胡萝卜extensin基因的信号肽序列引导ophc2基冈产物表达到胞外. 经过农杆菌叶盘法转化,共获得10l株转化植株,PCR检测证实有80株含有目的基因片段.从80株中随机挑选60株经westei.n blot检测,有24株呈阳性.ELISA分析结果表明,转基因植株生艮培养基中有OPt-IC2蛋白存在.酶活性测定实验表明,转基因植株可以释放有机磷降解酶到培养基中,并且具有有机磷水解酶活性.甲基对硫磷的植物耐受性实验结果显示,转基因植株可以抵抗较高浓度(0.02%甲基对硫磷)的甲基对硫磷而正常生长,与非转基因植株相比,获得更大的生物量.从形态上看,非转基冈植株在此浓度下己表现出明显的中毒症状.植株对其吸入的和其生长培养基中的农药进行降解的实验显示,在含O.02%(v/v)甲基对硫磷市售乳油的MS崮体培养基上生长14天后,与非转基因植株相比,转基冈植株将其中的甲基对硫磷降解到很低水平.上述结果表明,有机磷降解酶在植物中成功表达并初步证实了转基因植株的植物修复功能,这将为有机磷污染物的治理提供新的途径.
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