摘要
本文以粗糙龙胆 (Gentiana scabra Bunge) 为试材,采用常规方法结合现代植物化学分离手段,对其部分化学成分分离及结构鉴定,建立龙胆提取工艺及龙胆提取物HPLC指纹图谱.为龙胆资源的高效开发及可持续利用提供理论及方法学参考.为此,开展本项研究,并取得了如下进展: 1.采用(常压、中压)柱色谱对龙胆提取物过大孔树脂的10%、20%、50%乙醇洗脱部分进行中压柱层析及常压柱层析分离,得到六个化合物A1、A2、A3、A4、A5、A6,经理化鉴定和有机波谱鉴定,确定其化合物分别为:A1龙胆苦苷 (Gentipicroside)、化合物A2与A3是同分异构体,推测化合物A2和A3分别为下述三种化合物其中之一,3′-O-β-D-GIucopyranosyl Gentiopicroside, 4′-O-β-D-Glucopyranosyl Gentiopicroside, 6′-O-β-D-Glucopyranosyl Gentiopicroside, A4,3-O-β-D-Glucopyranoside,5-O-[4-hydroxy-E-cinnamoyl-(6)-β-D-glucopyranoside],A5,Sweroside;4′-O-[β-D-Glucopyranosyl-(1→3)-2,3-dihydroxybenzoyl],2′,3′,6′-tri-Ac,A6,2,3-Dihydroxybenzoic acid;3-Me ether,β-D-glucopyranosyl ester.同时从时间、耗能、前处理等方面,对常压柱层析、中压柱层析、高速逆流色谱三种方法制备龙胆苦苷进行了比较,得出高速逆流色谱法是较有效的一种方法. 2.首次应用高速逆流色谱(HSCCC)对龙胆中龙胆苦苷进行了制备性分离.以氯仿-甲醇-正丁醇-水(5∶4∶2∶4)为溶剂系统,下相作流动相,主机正转,转速 820r/min,流速2mL/min,固定相保留率38%,龙胆苦苷保留时间为320～380min,经HPLC检测,纯度可达96.68%. 3.以不同浓度的溶剂、超声提取时间、料液比为三因素,进行 L<,9> (3<'4>)因素、水平正交设计,确定以50%乙醇为溶剂、料液比1∶8、超声清洗30min为最优提取工艺,得膏率为45.90%,龙胆苦苷含量5.456%. 4.建立龙胆提取物HPLC指纹图谱. 色谱条件:色谱柱Hypersil ODS5um(4.6mm×250mm);以流动相A:甲醇,B:水,梯度洗脱,0～30min,A:20～80%;30～45min,A:80～20%;45～55rnin,A:20～20%;检测波长270nm;流速1mL/min;柱温35℃. 根据10批次供试品测定结果,经与参照物对照,以及比较所有测定和记录的色谱图,标定共有指纹峰10个,指纹图谱相似度均大于0.90. 本文创新点: 1.首次采用中压柱层析色谱技术对龙胆化学成分进行制备性分离研究,并建立二氯甲烷-甲醇中压梯度洗脱模式.为龙胆环烯醚萜类化学成分分离提供技术参考. 2.首次采用HSCCC分离制备龙胆苦苷.建立一种分离龙胆苦苷的新方法. 3.首次建立龙胆提取物HPLC指纹图谱.给龙胆提取工艺提供质量标准.
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