摘要
金丝垂柳J1010((Salix×aureo-pendula cl."J1010")属杨柳科、柳属;落叶乔木,叶披针形,枝条下垂,黄色,树姿优美,枝条颜色鲜艳(小枝生长季节呈黄绿色,休眠季节呈金黄色)抗病性强,雄株,春季不飞絮,不会造成环境污染,生长快;喜光,喜温暖湿润气候和湿润、深厚的土壤,但对土壤适应性较强,耐水湿,在河边生长尤好;在土层深厚、地势干燥的地区也能正常生长,萌芽力强. 本文研究金丝垂柳J010的组培再生体系,并利用石蜡切片技术对不同浓度、不同激素的愈伤组织进行了细胞形态学观察的研究,目的是研究影响金丝垂柳儿010再生的不同因素;通过根癌农杆菌介导法对金丝垂柳儿010进行遗传转化研究,经过抗生素筛选培养,获得了转基因抗性愈伤组织,并通过GUS组织化学染色对转基因愈伤组织进行了初步检测.1.金丝垂柳儿010组织培养再生体系的建立无菌材料快繁以MS+6.BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L和MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L交替使用最佳;以叶片、茎段作为外植体在分别附加BA1.0 mg/L+NAA0.1mg/L和6-BA1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L的MS培养基上诱导愈伤组织效果最好,愈伤组织诱导率可达100%;生根培养基为1/2MS附加NAA0.3mg/L,生根效果较好.2.胚性愈伤组织的建立愈伤组织诱导结果表明在愈伤组织诱导过程中,在MS培养基中添加1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.5mg/L的NAA能诱导出胚性愈伤组织.3.BADH基因转化体系的建立500mg/L,的头孢霉素(Cef)作为抗菌素抑制和去除农杆菌最佳,且对愈伤组织和组培苗生长影响不大.在卡那霉素(Kan)50mg/L时愈伤组织褐化死亡率达97.6%,利用农杆菌介导,以叶片作为外植体进行侵染,用1/2YEB和1/2MS液体培养基活化农杆菌;菌液浓度OD<,600>值0.5,预培养时间4天,共培养时间2天有利于提高转化率;转化后的外植体经GUS检测,颜色为淡蓝色,说明外源基因初步整合到植株基因组DNA中.4.石蜡切片观察愈伤组织内部结构细胞学研究表明金丝垂柳J1010体细胞胚产生于愈伤组织表面,起源于薄壁细胞,是否为单细胞起源还是多细胞起源还有待于进一步的研究.
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